人小氣管上皮細(xì)胞
人小氣管上皮細(xì)胞(Human Small Airway Epithelial Cells, HSAEpiC),提取自健康成人肺組織內(nèi)徑<2 mm的終末/呼吸性細(xì)支氣管區(qū)域,經(jīng)原代混合酶消化分離,通過細(xì)胞角蛋白19(CK19)、CK5、乙?;?微管蛋白免疫熒光鑒定,無HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、真菌污染。該細(xì)胞為單層立方/矮柱狀貼壁細(xì)胞,呈典型鵝卵石樣形態(tài),是肺遠(yuǎn)端氣道的物理與免疫屏障核心,具備分泌黏液、纖毛擺動(dòng)、形成緊密連接及向纖毛細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、Club細(xì)胞分化的潛能;廣泛應(yīng)用于慢阻肺(COPD)、哮喘、囊性纖維化、肺纖維化、病毒感染(如流感、新冠)的體外模型構(gòu)建及呼吸道藥物篩選,是肺部疾病基礎(chǔ)科研與臨床轉(zhuǎn)化的核心工具細(xì)胞。
檢測原理
本細(xì)胞株的核心培養(yǎng)原理,聚焦小氣道上皮的貼壁微環(huán)境與氣液界面(ALI)分化需求:采用膠原I/纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)器皿/Transwell小室,提供穩(wěn)定貼附基底;專用無血清SAEC培養(yǎng)基(含牛垂體提取物、EGF、胰島素、氫化ke的松)維持增殖與未分化表型;37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱保障代謝穩(wěn)定;ALI培養(yǎng)可切換PneumaCult™-ALI-S培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化為含纖毛、杯狀、Club細(xì)胞的假復(fù)層上皮。培養(yǎng)流程規(guī)范:復(fù)蘇后按1×10?–1.5×10? cells/cm2接種至包被器皿,靜置6–8小時(shí)完成貼壁;換液輕柔避免沖擊;傳代用0.05% Trypsin-EDTA溫和消化,鏡下細(xì)胞間隙擴(kuò)大、邊緣變圓立即終止,用含血清培養(yǎng)基中和;分化實(shí)驗(yàn)待細(xì)胞100%匯合后氣液界面培養(yǎng)21–28天,可檢測纖毛擺動(dòng)頻率與跨上皮電阻(TEER)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品針對原代人小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)與研究需求優(yōu)化制備,核心特點(diǎn)如下:1. **純正貼壁表型**:細(xì)胞100%貼壁生長,無成纖維細(xì)胞等雜細(xì)胞污染,鵝卵石形態(tài)均一,免疫陽性率>95%(CK19+);2. 質(zhì)控嚴(yán)格:每批次均通過無菌、支原體、病毒檢測及特異性標(biāo)志物(CK19、CK5、乙?;?微管蛋白)驗(yàn)證,附完整QC報(bào)告;3. 培養(yǎng)友好:適配常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備與Transwell ALI系統(tǒng),培養(yǎng)基配方標(biāo)準(zhǔn)化,無需額外復(fù)雜配制,貼壁速度快,復(fù)蘇存活率>85%;4. 增殖與分化可控:在增殖培養(yǎng)基中可穩(wěn)定傳代4–5代,保持前體細(xì)胞特性;ALI培養(yǎng)可高效分化出纖毛細(xì)胞與黏液分泌細(xì)胞,TEER值可達(dá)1000 Ω·cm2以上;5. 樣本適配場景廣:可用于細(xì)胞毒性、藥物處理、基因編輯、免疫熒光、Western blot、qPCR、ALI屏障功能檢測、病毒感染模型、共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn);6. 儲存運(yùn)輸便捷:凍存細(xì)胞采用程序降溫,干冰運(yùn)輸,-196℃液氮可長期保存,復(fù)蘇流程簡單,新手易操作。
適用樣本類型
本細(xì)胞適配多種肺部疾病研究的樣本與實(shí)驗(yàn)體系,適用樣本/實(shí)驗(yàn)場景包括:原代貼壁細(xì)胞培養(yǎng)(增殖/ALI分化模型)、呼吸道炎癥與屏障損傷模型(LPS/TNF-α/病毒誘導(dǎo))、黏液高分泌模型、氣道修復(fù)藥物篩選(小分子、抗體、外泌體)、基因轉(zhuǎn)染/沉默、跨上皮電阻(TEER)檢測、免疫共沉淀、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、肺組織移植的體內(nèi)模型樣本制備。推薦培養(yǎng)體系:膠原I包被的T25/T75培養(yǎng)瓶或Transwell小室,SAEC專用培養(yǎng)基,37℃、5% CO?培養(yǎng)箱;細(xì)胞接種密度1.2×10? cells/cm2,2天換液一次,匯合度80%時(shí)傳代;ALI分化建議使用PneumaCult™-ALI-S培養(yǎng)基。
備注:(具體樣本處理方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項(xiàng)
(一)儲存條件1. 凍存細(xì)胞需置于-196℃液氮中長期保存,嚴(yán)禁-20℃直接冷凍或常溫放置,避免溫度波動(dòng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡;2. 配套專用SAEC培養(yǎng)基開封后4℃避光保存,1個(gè)月內(nèi)用完;生長因子、激素組分需分裝后-20℃凍存,避免反復(fù)凍融;3. ALI分化培養(yǎng)基、膠原包被液需按說明書溫度儲存,底物/染色試劑避光保存,防止失效;4. 所有試劑儲存期間避免劇烈震蕩,確?;钚苑€(wěn)定,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋后密封冷藏,盡快使用。
(二)注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用,嚴(yán)禁用于人體臨床治療或直接注射,操作時(shí)嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范,佩戴PPE,避免細(xì)胞及培養(yǎng)基接觸皮膚黏膜;2. 復(fù)蘇時(shí)先將凍存管置于37℃水浴快速融化(1–2分鐘),嚴(yán)禁反復(fù)凍融;接種后靜置6小時(shí)再首ci
換液,避免未貼壁細(xì)胞流失;3. 小氣道上皮對yi酶敏感,消化時(shí)間嚴(yán)格控制在1–2分鐘,鏡下觀察到細(xì)胞邊緣變圓、間隙增大立即終止,用含血清培養(yǎng)基或大豆yi酶抑制劑中和;4. ALI培養(yǎng)時(shí)需等細(xì)胞100%匯合后再氣液界面培養(yǎng),避免分化不均;培養(yǎng)基開封后4℃避光保存,1個(gè)月內(nèi)用完,生長因子分裝-20℃凍存;5. 培養(yǎng)過程中避免頻繁移動(dòng)培養(yǎng)瓶/小室,防止貼壁細(xì)胞脫落;若出現(xiàn)細(xì)胞聚團(tuán)、貼壁不良,及時(shí)檢查包被質(zhì)量、培養(yǎng)基pH值與污染情況;6. 廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)基、耗材按生物安全規(guī)范處理,高壓滅菌后丟棄,尤其病毒感染實(shí)驗(yàn)后的廢棄物需雙重消毒;7. 嚴(yán)格按說明書操作,若有培養(yǎng)/ALI分化問題,可聯(lián)系廠家獲取技術(shù)支持,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。