人肝間充質(zhì)干細(xì)胞
人肝間充質(zhì)干細(xì)胞，是分離自成人肝臟組織（主要為肝小葉間質(zhì)、門靜脈周圍）的原代貼壁干細(xì)胞，是肝臟間質(zhì)中核心的多能干細(xì)胞。該細(xì)胞經(jīng)體外分離、純化及鑒定，CD44、CD90、CD105免疫熒光/流式染色驗(yàn)證陽(yáng)性，CD34、CD45染色陰性，通過(guò)嚴(yán)格無(wú)菌檢測(cè)（無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染），采用早期代次凍存，具備穩(wěn)定的體外培養(yǎng)特性及多向分化潛能。作為肝臟組織中的關(guān)鍵干細(xì)胞，其核心功能是維持肝臟組織穩(wěn)態(tài)、參與肝臟損傷修復(fù)、調(diào)節(jié)肝臟免疫應(yīng)答，可分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞、膽管上皮樣細(xì)胞及脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等，在肝纖維化、肝硬化、肝損傷修復(fù)、肝臟疾病機(jī)制研究及細(xì)胞治療相關(guān)研究中具有關(guān)鍵地位，是探索肝臟病理機(jī)制、篩選靶向藥物及細(xì)胞治療研發(fā)的重要細(xì)胞模型，適用于免疫印跡、免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell、誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)、ELISA等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、肝病學(xué)、藥理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等科研領(lǐng)域。
細(xì)胞特性
該細(xì)胞具有明確的干細(xì)胞表型及功能特征，核心特性如下：細(xì)胞形態(tài)典型，呈梭形或紡錘形，為嚴(yán)格貼壁生長(zhǎng)，胞體均勻、透亮、突起明顯，匯合后呈平行排列的漩渦狀單層，符合間充質(zhì)干細(xì)胞的典型形態(tài)特征；細(xì)胞特異性表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44、CD90、CD105，陽(yáng)性率≥95%，不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志物CD34、CD45及上皮細(xì)胞標(biāo)志物，經(jīng)免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證，標(biāo)志物表達(dá)穩(wěn)定，可特異性區(qū)分于其他肝臟細(xì)胞類型；細(xì)胞純度≥95%，無(wú)肝細(xì)胞、膽管細(xì)胞、造血細(xì)胞污染，無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染，細(xì)胞活性≥90%，每瓶?jī)龃婕?xì)胞數(shù)≥1×10?個(gè)，可穩(wěn)定傳代至5-8代，早期代次（P2-P4）增殖能力及分化潛能保持zui'jia；細(xì)胞具備*的多向分化潛能，在特定誘導(dǎo)條件下可分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞（表達(dá)白蛋白、細(xì)胞色素P450等）、膽管上皮樣細(xì)胞，也可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等間充質(zhì)來(lái)源細(xì)胞；細(xì)胞具備免疫調(diào)節(jié)功能，可分泌多種抗炎因子及生長(zhǎng)因子，抑制免疫細(xì)胞過(guò)度活化，參與肝臟免疫微環(huán)境調(diào)控；細(xì)胞為貼壁依賴性生長(zhǎng)，適配常規(guī)間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系，推薦使用明膠或纖維連接蛋白包被以增強(qiáng)貼壁與增殖能力，培養(yǎng)過(guò)程中可穩(wěn)定維持干細(xì)胞表型與多向分化潛能。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品具有活性高、純度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、分化潛能強(qiáng)、適用性廣、操作便捷等核心特點(diǎn)。細(xì)胞經(jīng)嚴(yán)格組織消化、密度梯度離心及差速貼壁法純化，純度≥95%，活性≥90%，細(xì)胞形態(tài)完整、突起清晰，可直接用于實(shí)驗(yàn)，無(wú)需額外純化或誘導(dǎo)，降低實(shí)驗(yàn)門檻；細(xì)胞特異性ji強(qiáng)，精準(zhǔn)來(lái)源于肝臟組織，保留該細(xì)胞te有的表型、增殖能力及多向分化潛能，能有效模擬肝臟間質(zhì)干細(xì)胞在生理及病理狀態(tài)下的反應(yīng)，區(qū)別于骨髓、 adipose等其他來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，保障實(shí)驗(yàn)的特異性與準(zhǔn)確性；細(xì)胞生理功能穩(wěn)定，早期代次凍存，傳代過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)、增殖能力、標(biāo)志物表達(dá)及分化潛能無(wú)明顯衰退，能穩(wěn)定提供高活性原代干細(xì)胞模型，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性與可靠性；適配常規(guī)間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系，培養(yǎng)條件溫和，操作流程簡(jiǎn)潔，無(wú)需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，適配各類基礎(chǔ)及轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用；細(xì)胞無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌污染，質(zhì)檢嚴(yán)格，可直接用于后續(xù)干細(xì)胞功能研究、誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)、藥物篩選、細(xì)胞治療相關(guān)研究等各類實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)污染風(fēng)險(xiǎn)，保障實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行；適用范圍覆蓋肝病學(xué)、藥理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、再生醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，可滿足肝臟疾病機(jī)制、干細(xì)胞增殖分化、肝損傷修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)、藥物篩選及細(xì)胞治療研發(fā)等多種科研場(chǎng)景需求，同時(shí)可用于與肝細(xì)胞、免疫細(xì)胞共培養(yǎng)，構(gòu)建肝臟組織模型，研究細(xì)胞間相互作用及肝臟修復(fù)機(jī)制。
適用范圍與樣本（細(xì)胞）處理
本產(chǎn)品適用于肝臟疾病機(jī)制研究、肝間充質(zhì)干細(xì)胞功能研究、干細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究、藥物篩選與評(píng)價(jià)、細(xì)胞治療研發(fā)、共培養(yǎng)模型構(gòu)建等場(chǎng)景；可用于肝纖維化、肝硬化、急性肝損傷等疾病的發(fā)病機(jī)制研究，探究肝間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡、分化及信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制；可用于肝間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞等方向的誘導(dǎo)分化研究，為肝臟再生醫(yī)學(xué)提供理論支撐；可用于抗肝纖維化、保肝、抗炎藥物的體外篩選與藥效評(píng)價(jià)，為藥物研發(fā)提供支撐；可用于細(xì)胞治療相關(guān)研究，評(píng)估肝間充質(zhì)干細(xì)胞在肝臟損傷修復(fù)中的作用及應(yīng)用潛力；可與肝細(xì)胞、免疫細(xì)胞共培養(yǎng)，構(gòu)建肝臟組織三維模型，研究細(xì)胞間相互作用及肝臟免疫微環(huán)境調(diào)控機(jī)制。（具體培養(yǎng)步驟、細(xì)胞維護(hù)、誘導(dǎo)分化方案、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)節(jié)請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書）
細(xì)胞處理與培養(yǎng)需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，避免細(xì)胞污染；收到細(xì)胞后，立即置于37℃水浴鍋中快速解凍（1-2分鐘，嚴(yán)禁反復(fù)凍融），解凍后立即加入預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)基（間充質(zhì)干細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 專用生長(zhǎng)添加劑）中，輕輕吹打混勻（動(dòng)作輕柔，避免損傷細(xì)胞突起），4℃、300×g 離心5分鐘，棄上清液，用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，接種至經(jīng)明膠或纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；培養(yǎng)24小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片，后續(xù)每2-3天更換一次培養(yǎng)液；細(xì)胞匯合度達(dá)70%-80%時(shí)進(jìn)行傳代，傳代比例為1:2–1:3，傳代時(shí)采用溫和的細(xì)胞分離方式，輕輕吹打瓶底使貼壁細(xì)胞脫落，離心后重懸接種，避免損傷細(xì)胞；該細(xì)胞為原代干細(xì)胞，建議在P4代前完成核心實(shí)驗(yàn)，以保證細(xì)胞的增殖能力及分化潛能穩(wěn)定；如需進(jìn)行誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)，可在細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按對(duì)應(yīng)方案進(jìn)行誘導(dǎo)；如需收集細(xì)胞或上清，可在細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，用PBS漂洗后處理或直接收集培養(yǎng)上清，適配各類實(shí)驗(yàn)需求。
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存條件
細(xì)胞凍存液（含10% DMSO、20% 胎牛血清及70% 間充質(zhì)干細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基）需采用程序化降溫盒（-1℃/min）緩慢降溫，置于-80℃密封保存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存（超過(guò)6個(gè)月）建議轉(zhuǎn)移至液氮（-196℃）中保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融、劇烈震蕩，防止細(xì)胞破裂、活性喪失及分化潛能衰退；凍存細(xì)胞取出后需快速解凍，避免在-20℃~0℃區(qū)間停留過(guò)久，防止細(xì)胞損傷；未接種的凍存細(xì)胞需密封保存，做好標(biāo)記（細(xì)胞名稱、凍存日期、批次、代次），避免混淆；培養(yǎng)基需置于2～8℃避光密封保存，避免反復(fù)凍融，使用前預(yù)熱至37℃，未用完的培養(yǎng)液需密封存放，建議1周內(nèi)用完；培養(yǎng)相關(guān)試劑（DMSO、包被試劑、生長(zhǎng)添加劑、誘導(dǎo)分化試劑等）需按對(duì)應(yīng)要求儲(chǔ)存，確保試劑活性，實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑需按需冷藏或冷凍保存，符合生物制品儲(chǔ)存的規(guī)范要求。
注意事項(xiàng)
1. 所有細(xì)胞操作需嚴(yán)格遵循無(wú)菌規(guī)范，實(shí)驗(yàn)器具需提前高壓滅菌處理，接種、換液、傳代時(shí)更換吸嘴，避免交叉污染，影響細(xì)胞活性、表型及分化潛能；細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需保持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，避免溫度、CO?濃度波動(dòng)，防止細(xì)胞脫壁或活性下降，同時(shí)避免劇烈震蕩，防止細(xì)胞突起損傷，契合干細(xì)胞培養(yǎng)的無(wú)菌操作與環(huán)境控制要求。
2. 細(xì)胞解凍、接種、傳代需嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂、活性喪失，影響培養(yǎng)效果及分化潛能；解凍時(shí)需快速均勻，接種后及時(shí)置于培養(yǎng)箱中，避免細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間暴露在室溫下；操作過(guò)程中動(dòng)作輕柔，避免吹打過(guò)度，防止損傷細(xì)胞突起，影響細(xì)胞間連接及生理功能，保障細(xì)胞活性、增殖能力及分化潛能穩(wěn)定。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需定期觀察細(xì)胞狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁不良、脫壁、形態(tài)異常（胞體皺縮、折光性差、突起消失、形態(tài)不規(guī)則）或污染（培養(yǎng)液渾濁、出現(xiàn)絮狀物）等情況，需及時(shí)處理；培養(yǎng)基需定期更換，避免營(yíng)養(yǎng)耗盡及代謝廢物積累，同時(shí)可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)調(diào)整傳代比例，確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，維持干細(xì)胞表型及分化潛能穩(wěn)定，契合原代間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)維護(hù)要點(diǎn)，建議定期檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)，監(jiān)測(cè)干細(xì)胞特性。
4. 實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，妥善處理廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)液及耗材，操作含DMSO的凍存液時(shí)需做好個(gè)人防護(hù)措施（佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡），避免皮膚接觸和吸入；避免細(xì)胞接觸強(qiáng)氧化劑、重金屬離子及蛋白變性物質(zhì)，防止干擾細(xì)胞活性、表型及分化潛能；培養(yǎng)期間可采用無(wú)菌檢測(cè)手段定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞無(wú)菌狀態(tài)，確保細(xì)胞質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用要求，契合生物實(shí)驗(yàn)室安全與質(zhì)量控制規(guī)范；進(jìn)行誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)時(shí)，需嚴(yán)格控制誘導(dǎo)條件，定期觀察分化狀態(tài)，確保誘導(dǎo)效果。
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