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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-原代細胞-小鼠垂體細胞


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PRODUCT CLASSIFICATION技術文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細介紹
純度高:細胞純度≥95%,經(jīng)形態(tài)學鑒定、免疫組化染色及微生物檢測(細菌、真菌、支原體、病毒),均無雜細胞及微生物污染,可直接用于實驗,能有效保證實驗結果的準確性;
生物學特性穩(wěn)定:細胞貼壁性好、增殖能力穩(wěn)定,原代細胞可傳代3-5代,永生化細胞系連續(xù)傳代15-20代后,仍能保持垂體細胞的典型形態(tài)、激素分泌功能及分子標志物表達,無明顯變異,實驗重復性強;
功能完整性:嚴格保留該細胞的內分泌核心功能,可穩(wěn)定分泌多種特異性激素,對激素釋放調控信號(如ACTH釋放激素)具有正常應答能力,能真實模擬體內垂體的生理調控過程,實驗結果具有良好的生理相關性,同時可穩(wěn)定表達α-MSH相關通路分子,適配腫瘤免疫相關研究;
操作便捷:采用標準化培養(yǎng)體系,解凍后可快速復蘇,培養(yǎng)條件溫和(常規(guī)37℃、5% CO?培養(yǎng)),無需特殊試劑及復雜操作,適合常規(guī)實驗室培養(yǎng)與操作,降低實驗門檻,同時可參考標準化細胞培養(yǎng)流程進行復蘇、傳代操作;
適用性廣:可用于多種科研場景,包括垂體發(fā)育機制研究、內分泌調控研究、激素分泌實驗、垂體相關疾?。ㄈ绱贵w功能低下、庫欣病)模型構建、抗腫瘤及內分泌相關藥物篩選、垂體-下丘腦軸調控機制研究、腫瘤免疫相關研究等,滿足不同科研需求,同時可用于細胞共培養(yǎng)、細胞凍存與復蘇相關實驗等場景。
細胞生物學實驗:包括細胞增殖、凋亡、周期、分化及激素分泌調控等基礎實驗,用于研究該細胞的生物學行為及功能特性,可開展細胞消化、傳代、凍存等相關操作優(yōu)化實驗;
藥物篩選與藥效評估:用于內分泌類藥物、垂體功能調節(jié)藥物的體外篩選,檢測藥物對垂體細胞激素分泌、增殖、凋亡的影響,評估藥物療效,也可用于腫瘤免疫相關藥物(如MC5R抑制劑)的初步篩選;
分子生物學實驗:用于垂體相關基因、蛋白(如ZBTB20、POMC、α-MSH)表達檢測,如RT-PCR、Western blot、免疫組化等實驗,探究垂體發(fā)育、內分泌調控及腫瘤免疫相關的分子機制,為垂體功能障礙相關疾病及腫瘤免yi治療的診治研究提供新思路;
臨床相關研究:用于模擬垂體相關疾?。ㄈ绱贵w功能低下、庫欣?。┑募毎P停瑸榧膊“l(fā)病機制研究、臨床診斷標志物篩選、治療方案優(yōu)化提供體外實驗支撐,可模擬垂體細胞移植后的功能恢復過程相關研究,同時可用于下丘腦-垂體-骨髓(HPB)軸相關疾病的機制研究;
其他:可用于細胞共培養(yǎng)、垂體-下丘腦軸調控機制研究、細胞凍存與復蘇相關實驗等科研場景,具體應用可結合實驗需求調整,同時可用于驗證玻璃化凍存等新型凍存技術對垂體相關細胞的影響,也可用于探究垂體激素對腫瘤免疫的調控作用。
凍存細胞:置于-196℃液氮中長期儲存,優(yōu)先選擇處于對數(shù)生長期的細胞進行凍存,凍存時需使用含20%FBS、10%DMSO的專用凍存液,儲存時需確保液氮液位穩(wěn)定,避免細胞反復凍融(凍融次數(shù)≤3次),否則會導致細胞活性下降、死亡或生物學特性改變,凍存后可在半年后復蘇檢測細胞存活率,確保細胞狀態(tài)良好,凍存細胞不宜長期存儲在-80℃環(huán)境中,應盡快轉移至液氮罐中;
復蘇后細胞:復蘇后的細胞需立即放入37℃水浴鍋中快速晃動融化(時間控制在1分鐘內),以1000r/min的速度離心5分鐘,去除凍存液中的DMSO后,接種至含wan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),24-48小時后更換培養(yǎng)基,去除死細胞,新復蘇細胞24小時內避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基,防止影響細胞貼壁,將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時,可輕輕旋松瓶蓋以保證氣體充分交換(若使用透氣性瓶蓋則無需旋松);
培養(yǎng)基儲存:配套wan全培養(yǎng)基需置于4℃冷藏儲存,避免高溫、強光直射,儲存期限不超過1個月,使用前需恢復至室溫并輕輕搖勻,解凍血清時需逐步解凍,避免快速變溫,防止產(chǎn)生血清沉淀物,血清中出現(xiàn)的纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物不影響細胞生長,可通過離心去除,除非必要,避免對血清進行熱滅活處理;
運輸條件:細胞運輸采用干冰低溫運輸(-80℃),運輸過程中需做好防震、防潮措施,避免溫度波動,運輸時間不超過72小時,接收后立即放入對應儲存環(huán)境,若無法立即儲存,可在干冰上暫時保存,避免常溫放置過久。
本產(chǎn)品僅用于科研,嚴禁用于臨床診斷、治療或其他非科研用途,嚴禁直接接觸人體或用于人體相關實驗,實驗過程中需嚴格遵循動物實驗相關倫理要求,未預約者不得進行細胞實驗;
細胞復蘇、培養(yǎng)、傳代需嚴格遵循無菌操作原則,實驗環(huán)境需符合細胞培養(yǎng)要求,實驗器具需經(jīng)紫外燈照射30分鐘和通風30分鐘后使用,操作前需用75%酒精對器具進行消毒,避免微生物污染;傳代時需控制消化時間,當細胞明顯變圓、細胞間隙增大并呈現(xiàn)流沙狀時停止消化,不同細胞消化時間可根據(jù)細胞特性調整,每隔30秒觀察一次細胞狀態(tài),避免過度消化損傷細胞,貼壁細胞傳代前需用5mL PBS輕輕潤洗細胞,避免沖擊細胞層,潤洗后吸去PBS再進行消化操作;
細胞培養(yǎng)過程中,需定期觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài),若培養(yǎng)基出現(xiàn)偏紫,多為CO?溢出導致堿性增加,可輕輕旋松瓶蓋放入培養(yǎng)箱校正,變紫培養(yǎng)基可繼續(xù)使用;若培養(yǎng)液變黃或變濁,可能是細胞密度過高或細菌污染,需及時消化傳代或丟棄處理;若發(fā)現(xiàn)真菌或霉菌污染,需用紫外燈照射培養(yǎng)箱去除孢子,并進行徹di消毒;
處理細胞支原體污染時,建議優(yōu)先更換新的細胞株,若細胞珍貴,可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內酯類抗生素等進行治療,支原體污染易復發(fā),需做好后續(xù)監(jiān)測;
細胞換液時機可根據(jù)細胞狀態(tài)調整,傳代后隔天或隔兩天換液為宜,若死細胞較多可第二天換液,生長速度較慢的細胞可減少換液次數(shù),細胞分布不均時可消化重鋪;
凍存細胞時,需將細胞懸液以1000-1200r/min離心3-5分鐘,丟棄上清液后用預冷的凍存液重懸細胞,細胞密度控制在1×10?~1×10?個/ml,分裝后標記細胞種類、凍存時間及操作人員,放入程序降溫盒置于-80℃過夜后,再轉移至液氮中長期儲存;
取出液氮罐中的細胞時,務必加強個人防護,避免凍傷;取材及細胞操作時動作要輕,避免牽拉和擠壓造成細胞機械損傷,切忌用水直接沖洗細胞,可用0.1M PBS輕輕沖洗;
實驗過程中產(chǎn)生的細胞廢液、廢棄培養(yǎng)基及用過的培養(yǎng)耗材,需經(jīng)滅菌處理后再丟棄,避免生物污染;操作人員需穿戴無菌手套、口罩、實驗服,做好個人防護,實驗結束后及時消毒實驗臺面。
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