人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞

檢測(cè)原理

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 純度高：細(xì)胞純度≥95%，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、免疫組化染色及微生物檢測(cè)（細(xì)菌、真菌、支原體、病毒），均無(wú)雜細(xì)胞及微生物污染，可直接用于實(shí)驗(yàn)，能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性；

• 生物學(xué)特性穩(wěn)定：細(xì)胞貼壁性好、增殖能力穩(wěn)定，原代細(xì)胞可傳代3-5代，永生化細(xì)胞系連續(xù)傳代15-20代后，仍能保持其典型形態(tài)、特異性標(biāo)志物表達(dá)及生理功能，無(wú)明顯變異，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng)；

• 功能完整性：保留其核心生理功能，可穩(wěn)定分泌血管活性物質(zhì)，具有良好的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、血管調(diào)控及免疫介導(dǎo)能力，能真實(shí)模擬體內(nèi)的生理功能及病理過(guò)程，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有良好的生理相關(guān)性；

• 操作便捷：采用標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系，解凍后可快速?gòu)?fù)蘇（復(fù)蘇存活率≥85%），培養(yǎng)條件溫和（常規(guī)37℃、5% CO?培養(yǎng)），無(wú)需特殊試劑及復(fù)雜操作，適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)與操作，降低實(shí)驗(yàn)門(mén)檻，同時(shí)可參考標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行復(fù)蘇、傳代操作；

• 適用性廣：可用于多種科研場(chǎng)景，包括肝臟微循環(huán)研究、肝臟損傷修復(fù)機(jī)制探究、肝臟相關(guān)疾?。ㄈ绺卫w維化、肝硬化、肝癌）模型構(gòu)建、保肝及抗肝纖維化藥物篩選、血管生物學(xué)研究等，滿(mǎn)足不同科研需求，同時(shí)可用于細(xì)胞共培養(yǎng)、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實(shí)驗(yàn)等場(chǎng)景。

適用樣本類(lèi)型

• 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：包括細(xì)胞增殖、凋亡、周期、黏附及血管活性物質(zhì)分泌等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，用于研究其生物學(xué)行為及功能特性，可開(kāi)展細(xì)胞消化、傳代、凍存等相關(guān)操作優(yōu)化實(shí)驗(yàn)；

• 藥物篩選與藥效評(píng)估：用于保肝藥物、抗肝纖維化藥物、血管活性藥物的體外篩選，檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡及血管活性物質(zhì)分泌的影響，評(píng)估藥物療效，為肝臟相關(guān)疾病的藥物研發(fā)提供支撐；

• 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：用于肝臟相關(guān)基因、蛋白（如CD31、vWF、內(nèi)皮素）表達(dá)檢測(cè)，如RT-PCR、Western blot、免疫組化等實(shí)驗(yàn)，探究其在肝病發(fā)病、損傷修復(fù)中的分子機(jī)制，為肝臟相關(guān)疾病的診治研究提供新思路；

• 臨床相關(guān)研究：用于模擬肝纖維化、肝硬化、肝癌等疾病的細(xì)胞模型，為疾病發(fā)病機(jī)制研究、臨床診斷標(biāo)志物篩選、治療方案優(yōu)化提供體外實(shí)驗(yàn)支撐，可模擬其在疾病狀態(tài)下的功能異常及修復(fù)過(guò)程；

• 其他：可用于細(xì)胞共培養(yǎng)（如與肝細(xì)胞、肝巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)）、肝臟微環(huán)境構(gòu)建、細(xì)胞凍存與復(fù)蘇相關(guān)實(shí)驗(yàn)等科研場(chǎng)景，具體應(yīng)用可結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整，同時(shí)可用于驗(yàn)證玻璃化凍存等新型凍存技術(shù)對(duì)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的影響。

儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)

（一）儲(chǔ)存條件

• 凍存細(xì)胞：置于-196℃液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存，優(yōu)先選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行凍存，凍存時(shí)需使用含20%FBS、10%DMSO的專(zhuān)用凍存液，儲(chǔ)存時(shí)需確保液氮液位穩(wěn)定，避免細(xì)胞反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤3次），否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活性下降、死亡或生物學(xué)特性改變，凍存后可在半年后復(fù)蘇檢測(cè)細(xì)胞存活率，確保細(xì)胞狀態(tài)良好，凍存細(xì)胞不宜長(zhǎng)期存儲(chǔ)在-80℃環(huán)境中，應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至液氮罐中；

• 復(fù)蘇后細(xì)胞：復(fù)蘇后的細(xì)胞需立即放入37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)融化（時(shí)間控制在1分鐘內(nèi)），以1000r/min的速度離心5分鐘，去除凍存液中的DMSO后，接種至含wan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24-48小時(shí)后更換培養(yǎng)基，去除死細(xì)胞，新復(fù)蘇細(xì)胞24小時(shí)內(nèi)避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基，防止影響細(xì)胞貼壁，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)，可輕輕旋松瓶蓋以保證氣體充分交換（若使用透氣性瓶蓋則無(wú)需旋松）；

• 培養(yǎng)基儲(chǔ)存：配套wan全培養(yǎng)基需置于4℃冷藏儲(chǔ)存，避免高溫、強(qiáng)光直射，儲(chǔ)存期限不超過(guò)1個(gè)月，使用前需恢復(fù)至室溫并輕輕搖勻，解凍血清時(shí)需逐步解凍，避免快速變溫，防止產(chǎn)生血清沉淀物，血清中出現(xiàn)的纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，可通過(guò)離心去除，除非必要，避免對(duì)血清進(jìn)行熱滅活處理；

• 運(yùn)輸條件：細(xì)胞運(yùn)輸采用干冰低溫運(yùn)輸（-80℃），運(yùn)輸過(guò)程中需做好防震、防潮措施，避免溫度波動(dòng)，運(yùn)輸時(shí)間不超過(guò)72小時(shí)，接收后立即放入對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境，若無(wú)法立即儲(chǔ)存，可在干冰上暫時(shí)保存，避免常溫放置過(guò)久。

（二）注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品僅用于科研，嚴(yán)禁用于臨床診斷、治療或其他非科研用途，嚴(yán)禁直接接觸人體或用于人體相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需嚴(yán)格遵循動(dòng)物實(shí)驗(yàn)相關(guān)倫理要求，未預(yù)約者不得進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；

• 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作原則，實(shí)驗(yàn)環(huán)境需符合細(xì)胞培養(yǎng)要求，實(shí)驗(yàn)器具需經(jīng)紫外燈照射30分鐘和通風(fēng)30分鐘后使用，操作前需用75%酒精對(duì)器具進(jìn)行消毒，避免微生物污染；傳代時(shí)需控制消化時(shí)間，當(dāng)細(xì)胞明顯變圓、細(xì)胞間隙增大并呈現(xiàn)流沙狀時(shí)停止消化，不同細(xì)胞消化時(shí)間可根據(jù)細(xì)胞特性調(diào)整，每隔30秒觀察一次細(xì)胞狀態(tài)，避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞，貼壁細(xì)胞傳代前需用5mL PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞，避免沖擊細(xì)胞層，潤(rùn)洗后吸去PBS再進(jìn)行消化操作；

• 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，需定期觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)，若培養(yǎng)基出現(xiàn)偏紫，多為CO?溢出導(dǎo)致堿性增加，可輕輕旋松瓶蓋放入培養(yǎng)箱校正，變紫培養(yǎng)基可繼續(xù)使用；若培養(yǎng)液變黃或變濁，可能是細(xì)胞密度過(guò)高或細(xì)菌污染，需及時(shí)消化傳代或丟棄處理；若發(fā)現(xiàn)真菌或霉菌污染，需用紫外燈照射培養(yǎng)箱去除孢子，并進(jìn)行消毒；

• 處理細(xì)胞支原體污染時(shí)，建議優(yōu)先更換新的細(xì)胞株，若細(xì)胞珍貴，可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素等進(jìn)行治療，支原體污染易復(fù)發(fā)，需做好后續(xù)監(jiān)測(cè)；

• 細(xì)胞換液時(shí)機(jī)可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整，傳代后隔天或隔兩天換液為宜，若死細(xì)胞較多可第二天換液，生長(zhǎng)速度較慢的細(xì)胞可減少換液次數(shù)，細(xì)胞分布不均時(shí)可消化重鋪；

• 凍存細(xì)胞時(shí)，需將細(xì)胞懸液以1000-1200r/min離心3-5分鐘，丟棄上清液后用預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度控制在1×10?~1×10?個(gè)/ml，分裝后標(biāo)記細(xì)胞種類(lèi)、凍存時(shí)間及操作人員，放入程序降溫盒置于-80℃過(guò)夜后，再轉(zhuǎn)移至液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存；

• 取出液氮罐中的細(xì)胞時(shí)，務(wù)必加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，避免凍傷；取材及細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，避免牽拉和擠壓造成細(xì)胞機(jī)械損傷，切忌用水直接沖洗細(xì)胞，可用0.1M PBS輕輕沖洗；

• 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的細(xì)胞廢液、廢棄培養(yǎng)基及用過(guò)的培養(yǎng)耗材，需經(jīng)滅菌處理后再丟棄，避免生物污染；操作人員需穿戴無(wú)菌手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服，做好個(gè)人防護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。

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