人卵巢表層上皮細(xì)胞

檢測(cè)原理

產(chǎn)品特點(diǎn)

• 純度高：細(xì)胞純度≥95%，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、免疫組化染色及微生物檢測(cè)（細(xì)菌、真菌、支原體、病毒），均無雜細(xì)胞及微生物污染，可直接用于實(shí)驗(yàn)，能有效保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，契合婦產(chǎn)科學(xué)及生殖醫(yī)學(xué)科研的嚴(yán)格要求；

• 生物學(xué)特性穩(wěn)定：細(xì)胞活性良好，在體外可穩(wěn)定培養(yǎng)5-7天，培養(yǎng)過程中形態(tài)及生理功能無明顯退變，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性強(qiáng)，可穩(wěn)定表達(dá)卵巢表層上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物，能正常響應(yīng)激素信號(hào)及損傷修復(fù)相關(guān)通路，經(jīng)短期傳代后仍能保持良好的細(xì)胞活性，符合短期科研實(shí)驗(yàn)的需求，部分細(xì)胞可保留Procr陽性干細(xì)胞相關(guān)特性，具有一定的損傷修復(fù)潛能；

• 功能完整性：保留該細(xì)胞的核心功能，具有良好的貼壁生長(zhǎng)能力和激素響應(yīng)能力，可參與損傷修復(fù)相關(guān)過程，能正常表達(dá)HE4、CA125等與卵巢疾病相關(guān)的標(biāo)志物，真實(shí)模擬人體內(nèi)該細(xì)胞的生理特性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有良好的臨床相關(guān)性，可用于卵巢上皮性腫瘤發(fā)病機(jī)制的初步探究；

• 操作便捷：采用人體上皮細(xì)胞專用標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系，解凍后可快速?gòu)?fù)蘇（復(fù)蘇存活率≥85%），培養(yǎng)條件溫和（常規(guī)37℃、5% CO?培養(yǎng)），無需特殊試劑及復(fù)雜操作，適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)與操作，降低實(shí)驗(yàn)門檻，可參考標(biāo)準(zhǔn)化人體原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)流程進(jìn)行復(fù)蘇、培養(yǎng)及功能學(xué)實(shí)驗(yàn)操作；

• 適用性廣：可用于多種科研場(chǎng)景，包括卵巢生理功能研究、卵巢表層上皮細(xì)胞損傷修復(fù)機(jī)制探究、卵巢上皮性腫瘤發(fā)病機(jī)制研究、婦科疾病診斷標(biāo)志物篩選、激素調(diào)控研究及相關(guān)藥物篩選與藥效評(píng)估等，滿足不同科研需求，同時(shí)可用于卵巢組織類器官構(gòu)建、細(xì)胞共培養(yǎng)等場(chǎng)景，為卵巢相關(guān)科研及臨床轉(zhuǎn)化提供可靠的細(xì)胞模型，也可用于生育力保護(hù)相關(guān)基礎(chǔ)研究。

適用樣本類型

• 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：包括細(xì)胞增殖、凋亡、損傷修復(fù)及激素響應(yīng)等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，用于研究其生物學(xué)行為及生理功能，可開展細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化、激素調(diào)控機(jī)制、損傷修復(fù)相關(guān)信號(hào)通路等相關(guān)實(shí)驗(yàn)，同時(shí)可用于卵巢上皮干細(xì)胞相關(guān)特性研究，為卵巢生理機(jī)制研究提供支撐；

• 婦科疾病相關(guān)研究：用于卵巢上皮性腫瘤發(fā)病機(jī)制探究，可作為體外模型模擬卵巢上皮細(xì)胞的異常增殖及惡變過程，結(jié)合HE4、CA125等標(biāo)志物檢測(cè)，探究腫瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，同時(shí)可用于卵巢功能障礙相關(guān)研究，為婦科疾病的診治提供新思路；

• 藥物篩選與藥效評(píng)估：用于婦科疾病相關(guān)藥物（如卵巢癌預(yù)防藥物、激素調(diào)節(jié)藥物）的體外篩選，檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞活性、激素響應(yīng)及標(biāo)志物表達(dá)的影響，評(píng)估藥物療效及安全性，為婦科藥物研發(fā)提供支撐，同時(shí)可用于藥物對(duì)卵巢上皮細(xì)胞損傷修復(fù)的調(diào)控研究；

• 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：用于卵巢表層上皮細(xì)胞相關(guān)基因、蛋白表達(dá)檢測(cè)，如RT-PCR、Western blot、免疫組化等實(shí)驗(yàn)，探究激素調(diào)控、損傷修復(fù)及腫瘤相關(guān)分子機(jī)制，同時(shí)可用于HE4、CA125等標(biāo)志物的表達(dá)調(diào)控研究，為卵巢疾病診斷提供技術(shù)支撐；

• 其他：可用于卵巢組織類器官構(gòu)建、細(xì)胞共培養(yǎng)、生育力保護(hù)相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)等科研場(chǎng)景，具體應(yīng)用可結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整，同時(shí)可用于驗(yàn)證新型培養(yǎng)技術(shù)對(duì)細(xì)胞活性及功能的影響，建議在細(xì)胞培養(yǎng)5-7天內(nèi)開展核心實(shí)驗(yàn)，確保細(xì)胞功能穩(wěn)定，可參考玻璃化凍存相關(guān)技術(shù)開展細(xì)胞長(zhǎng)期保存研究。

儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)

（一）儲(chǔ)存條件

• 復(fù)蘇后細(xì)胞：復(fù)蘇后的細(xì)胞需立即放入37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)融化（時(shí)間控制在1分鐘內(nèi)），以800-1000r/min的速度離心5分鐘，去除凍存液中的DMSO后，接種至含專用wan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24-48小時(shí)后更換培養(yǎng)基，去除死細(xì)胞及未貼壁細(xì)胞，新復(fù)蘇細(xì)胞24小時(shí)內(nèi)避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基，防止影響細(xì)胞貼壁及增殖，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)，可輕輕旋松瓶蓋以保證氣體充分交換（若使用透氣性瓶蓋則無需旋松）；

• 培養(yǎng)基儲(chǔ)存：配套專用wan全培養(yǎng)基需置于4℃冷藏儲(chǔ)存，避免高溫、強(qiáng)光直射，儲(chǔ)存期限不超過1個(gè)月，使用前需恢復(fù)至室溫并輕輕搖勻，解凍血清時(shí)需逐步解凍，避免快速變溫，防止產(chǎn)生血清沉淀物，血清中出現(xiàn)的纖維蛋白、磷酸鈣等沉淀物不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，可通過離心去除，培養(yǎng)基中需添加新鮮上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及適量激素，現(xiàn)配現(xiàn)用，避免生長(zhǎng)因子及激素失活；

• 凍存細(xì)胞：置于-196℃液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存，優(yōu)先選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、活性穩(wěn)定的細(xì)胞進(jìn)行凍存，凍存時(shí)需使用人體上皮細(xì)胞專用凍存液（含20%FBS、10%DMSO、5%上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子），可采用玻璃化凍存法減少細(xì)胞損傷，儲(chǔ)存時(shí)需確保液氮液位穩(wěn)定，避免細(xì)胞反復(fù)凍融（凍融次數(shù)≤3次），否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活性下降、功能異常或死亡，凍存后可在半年后復(fù)蘇檢測(cè)細(xì)胞存活率，確保細(xì)胞狀態(tài)良好，凍存細(xì)胞不宜長(zhǎng)期存儲(chǔ)在-80℃環(huán)境中，應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至液氮罐中；

• 運(yùn)輸條件：細(xì)胞運(yùn)輸采用干冰低溫運(yùn)輸（-80℃），運(yùn)輸過程中需做好防震、防潮措施，避免溫度波動(dòng)，運(yùn)輸時(shí)間不超過72小時(shí)，接收后立即放入對(duì)應(yīng)儲(chǔ)存環(huán)境，若無法立即儲(chǔ)存，可在干冰上暫時(shí)保存，避免常溫放置過久，運(yùn)輸過程中需做好細(xì)胞標(biāo)識(shí)，防止混淆，運(yùn)輸前可適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞密度，確保復(fù)蘇后存活率，卵巢組織相關(guān)細(xì)胞運(yùn)輸可參考4-8℃恒溫轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)規(guī)范。

（二）注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品僅用于科研，嚴(yán)禁用于臨床診斷、治療或其他非科研用途，嚴(yán)禁直接接觸人體或用于人體相關(guān)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)過程中需嚴(yán)格遵循人體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)相關(guān)倫理要求，未預(yù)約者不得進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞取材及使用需符合倫理規(guī)范；

• 處理細(xì)胞支原體污染時(shí)，建議優(yōu)先更換新的細(xì)胞株，若細(xì)胞珍貴，可嘗試使用支原體清除試劑進(jìn)行治療，支原體污染易復(fù)發(fā)，需做好后續(xù)監(jiān)測(cè)，支原體污染會(huì)影響細(xì)胞增殖、激素響應(yīng)及標(biāo)志物表達(dá)，需嚴(yán)格控制；

• 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代需嚴(yán)格遵循無菌操作原則，實(shí)驗(yàn)環(huán)境需符合細(xì)胞培養(yǎng)要求，實(shí)驗(yàn)器具需經(jīng)紫外燈照射30分鐘和通風(fēng)30分鐘后使用，操作前需用75%酒精對(duì)器具進(jìn)行消毒，避免微生物污染；該細(xì)胞為貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，傳代時(shí)可采用溫和消化方式，避免過度消化損傷細(xì)胞，傳代比例建議為1:2-1:3，確保細(xì)胞增殖空間，傳代過程中需避免細(xì)胞聚團(tuán)過多，可利用流式分選方法優(yōu)化細(xì)胞純度；

• 細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需定期觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)及激素響應(yīng)情況，若培養(yǎng)基出現(xiàn)異常顏色，多為CO?溢出或細(xì)胞代謝異常導(dǎo)致，可輕輕旋松瓶蓋放入培養(yǎng)箱校正，異常顏色培養(yǎng)基可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)判斷是否繼續(xù)使用；若培養(yǎng)液變黃或變濁，可能是細(xì)胞密度過高或細(xì)菌污染，需及時(shí)傳代或丟棄處理；若發(fā)現(xiàn)真菌或霉菌污染，需用紫外燈照射培養(yǎng)箱去除孢子，并進(jìn)行消毒；培養(yǎng)過程中避免劇烈晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，防止細(xì)胞脫落影響生長(zhǎng)，培養(yǎng)體系中需嚴(yán)格控制激素濃度，避免影響細(xì)胞生理功能；

• 細(xì)胞換液時(shí)機(jī)可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)調(diào)整，復(fù)蘇后隔天更換一次培養(yǎng)基，后續(xù)每2-3天更換一次，換液時(shí)動(dòng)作輕柔，緩慢加入培養(yǎng)基，避免沖擊細(xì)胞，換液量為培養(yǎng)基總量的1/2-2/3，避免wan全更換培養(yǎng)基導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)成分驟變，影響細(xì)胞增殖及功能，換液時(shí)可收集上清液用于HE4、CA125等標(biāo)志物檢測(cè)；

• 凍存細(xì)胞時(shí)，需將細(xì)胞懸液以800-1000r/min離心3-5分鐘，丟棄上清液后用預(yù)冷的人體上皮細(xì)胞專用凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度控制在1×10?~1×10?個(gè)/ml，分裝后標(biāo)記細(xì)胞種類、凍存時(shí)間及操作人員，放入程序降溫盒置于-80℃過夜后，再轉(zhuǎn)移至液氮中長(zhǎng)期儲(chǔ)存，建立細(xì)胞凍存臺(tái)賬，便于追溯，凍存前可檢測(cè)細(xì)胞活性及標(biāo)志物表達(dá)，確保凍存細(xì)胞功能穩(wěn)定；

• 取出液氮罐中的細(xì)胞時(shí)，務(wù)必加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，避免凍傷；取材及細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕，避免牽拉和擠壓造成細(xì)胞機(jī)械損傷，切忌用水直接沖洗細(xì)胞，可用0.1M PBS輕輕沖洗，避免影響細(xì)胞活性及激素響應(yīng)功能；

• 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的細(xì)胞廢液、廢棄培養(yǎng)基及用過的培養(yǎng)耗材，需經(jīng)滅菌處理后再丟棄，避免生物污染；操作人員需穿戴無菌手套、口罩、實(shí)驗(yàn)服，做好個(gè)人防護(hù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)消毒實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，實(shí)驗(yàn)廢棄物需按生物安全規(guī)范處理，含激素及標(biāo)志物檢測(cè)相關(guān)廢液需單獨(dú)收集處理，避免交叉污染。

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