產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1401VERO-TB非洲綠猴腎細(xì)胞克隆株細(xì)胞系


廠家實(shí)力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來源與篩選機(jī)制
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
受體表達(dá):TLR2 與 TLR4 表達(dá)量分別為親本細(xì)胞的 2.5 倍和 1.8 倍(qPCR 檢測(cè)),表面受體密度達(dá) 8×10?分子 / 細(xì)胞(流式細(xì)胞術(shù)),可高效識(shí)別結(jié)核分枝桿菌的脂類與肽聚糖抗原。
免疫應(yīng)答:經(jīng) ESAT-6(5μg/mL)刺激 24 小時(shí)后,IL-6 分泌量達(dá) 800pg/mL,TNF-α 達(dá) 500pg/mL,分別為親本細(xì)胞的 3 倍和 2.5 倍,且應(yīng)答閾值低(最di檢測(cè)限 0.1μg/mL ESAT-6),優(yōu)于傳統(tǒng)巨噬細(xì)胞模型(最di檢測(cè)限 1μg/mL)。
生物安全性:無(wú)致瘤性(裸鼠接種實(shí)驗(yàn)陰性),外源微生物檢測(cè)均為陰性,適合作為診斷試劑生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)。
結(jié)核診斷試劑研發(fā)
抗原檢測(cè)平臺(tái):利用其對(duì)結(jié)核抗原的高敏感性,構(gòu)建夾心 ELISA 檢測(cè)體系。例如,以 VERO-TB 細(xì)胞裂解液包被微孔板,可捕獲樣本中低至 10pg/mL 的 ESAT-6,較傳統(tǒng) Vero 細(xì)胞檢測(cè)靈敏度提升 10 倍,對(duì)肺結(jié)核患者痰液樣本的檢出率達(dá) 92%,特異性>95%,顯著優(yōu)于商用試劑盒(檢出率 85%)。
γ- 干擾素釋放實(shí)驗(yàn)(IGRA)優(yōu)化:作為抗原呈遞細(xì)胞,可高效激活結(jié)核特異性 T 細(xì)胞分泌 IFN-γ。將 VERO-TB 負(fù)載 PPD 抗原后與外周血單個(gè)核細(xì)胞共培養(yǎng),IFN-γ 檢測(cè)靈敏度提升 40%,對(duì)潛伏性結(jié)核感染的檢出率達(dá) 88%,較傳統(tǒng)方法減少假陰性結(jié)果。
抗結(jié)核藥物篩選與機(jī)制研究
藥物活性評(píng)估:可用于篩選具有免疫調(diào)節(jié)作用的抗結(jié)核藥物。例如,檢測(cè)中藥提取物對(duì) ESAT-6 誘導(dǎo)的 IL-6 分泌的抑制效果,發(fā)現(xiàn)天然活性成分的半數(shù)抑制濃度為 20μM,且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性(半數(shù)毒性濃度>200μM),后續(xù)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其可降低結(jié)核小鼠的肺部炎癥水平,為開發(fā)宿主導(dǎo)向治療藥物提供候選分子。
耐藥機(jī)制研究:通過構(gòu)建耐藥結(jié)核分枝桿菌感染模型,發(fā)現(xiàn) VERO-TB 細(xì)胞對(duì)耐藥株的識(shí)別能力下降(細(xì)胞因子分泌減少 50%),與耐藥株細(xì)胞壁脂阿拉伯甘露聚糖結(jié)構(gòu)改變相關(guān),為解析耐藥菌的免疫逃逸機(jī)制提供新線索。
結(jié)核疫苗免疫原性評(píng)估
候選疫苗篩選:可評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的抗原特異性免疫應(yīng)答。例如,對(duì)重組 BCG 疫苗免疫的小鼠血清,通過 VERO-TB 細(xì)胞檢測(cè)其阻斷 ESAT-6 結(jié)合的能力,中和率達(dá) 70% 的疫苗株在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出更強(qiáng)的保護(hù)力(肺部菌落數(shù)減少 100 倍),為疫苗優(yōu)化提供快速評(píng)價(jià)工具。
黏膜免疫研究:將 VERO-TB 細(xì)胞與支氣管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)構(gòu)建 3D 模型,可模擬結(jié)核桿菌肺部感染微環(huán)境,評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的黏膜抗體(如 IgA)的保護(hù)效果,發(fā)現(xiàn)分泌型 IgA 可降低結(jié)核桿菌的細(xì)胞黏附率 60%,為黏膜疫苗設(shè)計(jì)提供依據(jù)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入抗感染試劑預(yù)防污染。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí),棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細(xì)胞解離液,37℃孵育 3-4 分鐘至細(xì)胞脫落,含血清培養(yǎng)基終止消化后按 1:4 比例傳代,避免消化過度影響細(xì)胞活性。
凍存保護(hù):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個(gè) /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴解凍,離心去除 DMSO,傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。
抗原刺激與檢測(cè)操作
結(jié)核抗原處理:將 ESAT-6 或 PPD 抗原用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋至 0.1-10μg/mL,加入鋪滿 VERO-TB 細(xì)胞的 96 孔板(1×10?細(xì)胞 / 孔),37℃孵育 24 小時(shí),收集上清檢測(cè)細(xì)胞因子。
細(xì)胞因子檢測(cè):采用 ELISA 試劑盒檢測(cè) IL-6、TNF-α 等,或通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面 CD80/CD86 的表達(dá)變化,評(píng)估抗原刺激強(qiáng)度。
優(yōu)勢(shì):
抗原敏感性高:對(duì)結(jié)核分枝桿菌抗原的檢測(cè)閾值顯著低于親本細(xì)胞與傳統(tǒng)免疫細(xì)胞模型,適合低濃度抗原樣本的檢測(cè)。
培養(yǎng)穩(wěn)定性好:貼壁生長(zhǎng)特性穩(wěn)定,傳代操作簡(jiǎn)便,可實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng),批間實(shí)驗(yàn)差異<8%。
功能多樣性:既可作為檢測(cè)平臺(tái),又能用于藥物篩選與疫苗評(píng)估,覆蓋結(jié)核研究多個(gè)領(lǐng)域。
局限性:
非人源模型限制:作為猴源細(xì)胞,其免疫受體與人類存在物種差異(TLR2 同源性 90%),部分研究結(jié)果需在人源細(xì)胞中驗(yàn)證。
單一克隆特性:對(duì)非結(jié)核分枝桿菌(如鳥分枝桿菌)的敏感性較低,應(yīng)用范圍受限。
血清依賴:無(wú)血清培養(yǎng)基中 TLR 表達(dá)量下降 20%,影響抗原應(yīng)答效率,增加大規(guī)模培養(yǎng)成本。
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